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　　大鼠白三烯B4(LTB4)ELISA檢測試劑盒技術(shù)說明書

　　BS-2924 大鼠白三烯B4(LTB4)ELISA試劑盒

　　一、產(chǎn)品概述

　　本試劑盒采用雙抗體夾心法，用于定量檢測大鼠血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清等樣本中的白三烯B4(LTB4)水平。LTB4是花生四烯酸代謝產(chǎn)物，在炎癥反應(yīng)和免疫調(diào)節(jié)中起關(guān)鍵作用?1。

　　二、檢測原理

　　?包被抗體?：微孔板預(yù)包抗大鼠LTB4單克隆抗體?1?樣本孵育?：樣本中的LTB4與包被抗體結(jié)合

　　?酶標(biāo)抗體?：加入生物素化的檢測抗體形成復(fù)合物?2?顯色反應(yīng)?：加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的鏈霉親和素，TMB底物顯色?1?終止反應(yīng)?：加入終止液終止反應(yīng)

　　?檢測?：450nm波長測定吸光度(OD值)，濃度與OD值呈正相關(guān)?1三、試劑盒組成

　　組分規(guī)格保存條件

　　預(yù)包被微孔板96孔2-8℃

　　標(biāo)準(zhǔn)品(凍干)6管(1000-0pg/mL)-20℃

　　樣本稀釋液15mL室溫

　　生物素化抗體(100×)120μL-20℃

　　酶標(biāo)復(fù)合物12mL2-8℃

　　TMB顯色液(A/B)各6mL2-8℃避光

　　終止液12mL室溫

　　20×洗滌液60mL室溫

　　四、樣本處理

　　?血清/血漿樣本?：

　　使用EDTA/肝素抗凝管采集

　　2000-3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘

　　避免溶血樣本，2-8℃保存≤48小時(shí)，長期保存需-20℃?2?細(xì)胞培養(yǎng)上清?：

　　離心去除細(xì)胞碎片

　　可直接檢測或適當(dāng)稀釋

　　五、實(shí)驗(yàn)步驟

　　?試劑準(zhǔn)備?：

　　洗滌液：用蒸餾水1:20稀釋濃縮液?2標(biāo)準(zhǔn)品：用樣本稀釋液配制梯度濃度(1000-0pg/mL)

　　酶標(biāo)抗體工作液：按說明書比例稀釋

　　?操作流程?：

　　加樣(100μL/孔) → 37℃孵育90分鐘 → 洗滌4次

　　加酶標(biāo)抗體(100μL/孔) → 37℃孵育60分鐘 → 洗滌4次

　　加TMB顯色液(100μL/孔) → 避光顯色15-20分鐘

　　加終止液(50μL/孔) → 10分鐘內(nèi)測定OD值

　　六、技術(shù)參數(shù)

　　?檢測范圍?：62.5-1000pg/mL

　　?靈敏度?：≤1.0pg/mL

　　?精密度?：批內(nèi)CV<10%，批間CV<15%

　　?回收率?：85%-115%

　　?特異性?：與結(jié)構(gòu)類似物無交叉反應(yīng)

　　七、注意事項(xiàng)

　　實(shí)驗(yàn)前所有試劑需平衡至室溫

　　以防試劑間交叉污染，使用一次性槍頭

　　顯色反應(yīng)時(shí)間需嚴(yán)格控制，避免過度顯色

　　酶標(biāo)儀需提前預(yù)熱，建議使用雙波長(450/630nm)檢測

　　本產(chǎn)品僅用于科研，不用于臨床診斷

　　八、儲存條件

　　未開封試劑盒：2-8℃保存，有效期6個(gè)月

　　開封后組分：按說明書要求分別保存

　　注：以上僅供參考，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。

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