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0.1mL 96孔PCR板使用指南
更新時(shí)間:2025-09-19瀏覽:180次

  0.1mL 96孔PCR板使用指南

  1. ?耗材選擇與適配性?

  材質(zhì)與規(guī)格?:選擇聚丙烯(PP)材質(zhì)、0.1mL容積的96孔板,確保與熒光定量PCR儀(如ABI 7500fast、Roche 480等)的加熱模塊匹配?。

  顏色與裙邊?:

  透明板適用于底部光源儀器,乳白色板(如伯樂CFX系列)適合頂部熒光采集?。

  根據(jù)儀器需求選擇無裙邊、半裙邊或全裙邊設(shè)計(jì),避免因邊緣凸起導(dǎo)致加熱不均?。

  2. ?實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備?

  環(huán)境控制?:在超凈臺或生物安全柜中操作,紫外線消毒30分鐘以上,使用無核酸酶槍頭/離心管?。

  樣本布局?:優(yōu)先使用中間60孔(棄用邊緣孔),縱向排列樣本以減少熱蓋壓力不均影響?。

  3. ?加樣與密封?

  加樣技巧?:

  每孔反應(yīng)體系10-20μL,采用反向移液法(高粘度樣本)或正向移液法(常規(guī)樣本),誤差控制在±1%內(nèi)?。

  加樣后瞬時(shí)離心(1000rpm×10s)消除氣泡?。

  密封方法?:使用光學(xué)膜密封,先縱向壓膜,再橫向按壓邊緣,確保無漏液?。

  4. ?上機(jī)與擴(kuò)增?

  儀器設(shè)置?:確認(rèn)溫度、循環(huán)數(shù)、熒光采集參數(shù)與試劑盒說明書一致,注意是否需ROX參比染料?。

  耗材檢查?:避免使用普通PCR耗材(透光性差)或錯誤規(guī)格的板(如0.2mL板用于0.1mL模塊),防止熱傳導(dǎo)不均或假陰性?。

  5. ?常見問題與解決?

  擴(kuò)增異常?:若曲線異常,檢查耗材質(zhì)量(如封膜變形導(dǎo)致光學(xué)扭曲)、試劑有效期及凍融次數(shù)?。

  蒸發(fā)控制?:密封不嚴(yán)會導(dǎo)致ROX熒光上抬,需確保封膜緊密?。

  6. ?注意事項(xiàng)?

  一次性使用?:PCR板不可重復(fù)使用或剪開,避免交叉污染和實(shí)驗(yàn)誤差?。

  存儲條件?:未開封試劑盒建議2-8℃保存,部分組分需-20℃避光?。

  注:以上僅供參考,科研使用,不作為實(shí)際數(shù)據(jù),實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。

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