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如何正確配制ELISA試劑盒中的稀釋液?
ELISA試劑盒中稀釋液的配制需根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇合適類型(如標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液、樣品稀釋液或抗體稀釋液)，并嚴(yán)格遵循試劑盒說(shuō)明書(shū)或以下通用方法：
一、稀釋液類型與配制原則?
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液?
用于梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品，通常含緩沖鹽(如PBS)和穩(wěn)定劑(如BSA、甘油)，確保標(biāo)準(zhǔn)品濃度準(zhǔn)確且穩(wěn)定?。
示例配方：0.1% BSA + PBS(pH 7.4)?。
樣品稀釋液?
用于降低樣本基質(zhì)干擾(如血清、血漿)，常含封閉劑(如5%脫脂奶粉或1% BSA)?。
示例配方：5%小牛血清 + PBS(pH 7.4)?。
抗體稀釋液?
保護(hù)抗體活性，減少非特異性結(jié)合，需含緩沖液(如TBS)和穩(wěn)定劑(如甘油)?。
示例配方：0.1% Tween-20 + 1% BSA + PBS?。
二、通用配制步驟?
溶解與混勻?
凍干標(biāo)準(zhǔn)品需短暫離心后，按說(shuō)明書(shū)加入指定體積稀釋液，室溫靜置10-30分鐘溶解?。
粉末試劑(如BSA)需溶解于緩沖液中，避免未溶顆粒影響實(shí)驗(yàn)?。
梯度稀釋?
使用倍比稀釋法(如1:2、1:4)，每步充分混勻(吹打10次或渦旋5秒)?。
稀釋后短暫離心，確保管壁液體沉底?。
現(xiàn)配現(xiàn)用?
含酶標(biāo)記物或生物素的工作液需臨時(shí)配制，避免活性下降?。
三、注意事項(xiàng)?
水質(zhì)要求?：使用去離子水或雙蒸水，避免自來(lái)水中的離子干擾?。
pH匹配?：稀釋液pH需與試劑盒要求一致(如pH 7.4 PBS用于多數(shù)ELISA)?。
分裝保存?：未用完的稀釋液可分裝后-20℃保存，避免反復(fù)凍融?。
四、常見(jiàn)問(wèn)題?
背景高?：可能因封閉劑不足或稀釋液含雜質(zhì)，建議更換高純度BSA或脫脂奶粉?。
信號(hào)弱?：檢查稀釋液是否含蛋白酶抑制劑(如血清樣本需添加)?。
如需具體試劑盒的稀釋液配方，請(qǐng)參考說(shuō)明書(shū)或聯(lián)系供應(yīng)商?。
注：僅供科研使用，以上資料供參考，如需具體產(chǎn)品說(shuō)明請(qǐng)咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。
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