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ELISA雙抗體夾心法有哪些常見問題?
更新時(shí)間:2025-08-29瀏覽:234次

  ELISA雙抗體夾心法有哪些常見問題?

  以下是ELISA雙抗體夾心法實(shí)驗(yàn)中常見問題的系統(tǒng)分析及解決方案,本生技術(shù)小編結(jié)合多來源信息整理:

  一、樣本相關(guān)異常?

  假陽性/高背景?

  原因?:血液溶血或纖維蛋白未清除,血紅蛋白干擾顯色?

  對策?:3000rpm離心15min,取上清檢測,避免溶血樣本?

  稀釋線性異常?

  現(xiàn)象?:樣本孔OD值超出標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍(>2.0或<0.1)?

  調(diào)整?:按10倍梯度稀釋重測,確保OD值在0.1-1.5區(qū)間?

  二、操作技術(shù)問題?

  洗滌不充分?

  表現(xiàn)?:整板均勻顯色(花板)或復(fù)孔CV>20%?

  優(yōu)化?:洗板5次,每次拍板后更換吸水紙,避免交叉污染?

  孵育條件失控?

  溫度?:超過37℃導(dǎo)致非特異性結(jié)合增加(建議恒溫箱校準(zhǔn))?

  時(shí)間?:超過說明書建議時(shí)間(通??乖跤?小時(shí))?

  三、試劑與設(shè)備問題?

  抗體配對不當(dāng)?

  影響?:鉤狀效應(yīng)(高濃度樣本假陰性)?

  驗(yàn)證?:通過棋盤滴定確定最佳抗體濃度比?

  底物失效?

  判斷?:陽性對照孔顯色淺或無色?

  處理?:現(xiàn)配現(xiàn)用TMB,避光保存,避免金屬離子污染?

  四、數(shù)據(jù)分析異常?

  標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合不佳?

  指標(biāo)?:R2<0.99或低濃度點(diǎn)偏離?

  措施?:檢查標(biāo)準(zhǔn)品溶解是否充分,復(fù)孔重復(fù)性?

  靈敏度不足?

  標(biāo)準(zhǔn)?:最高濃度孔OD值應(yīng)>1.0?

  提升?:延長封閉時(shí)間(2小時(shí))或更換高親和力抗體?

  注:以上資料僅供參考,如需進(jìn)一步了解產(chǎn)品詳情,可參考品牌供應(yīng)商或技術(shù)老師。

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