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　　ELISA實(shí)驗(yàn)可能出現(xiàn)的11個(gè)問題及原因分析

　　以下是天津本生ELISA實(shí)驗(yàn)中可能出現(xiàn)的11個(gè)常見問題及其原因分析，綜合多個(gè)專業(yè)來源整理：

　　一、顯色弱或無信號

　　試劑活性降低?

　　運(yùn)輸/保存溫度過高或試劑過期導(dǎo)致酶失活

　　孵育條件不當(dāng)?

　　溫度未達(dá)37℃或時(shí)間不足，抗原抗體結(jié)合不充分

　　加樣誤差?

　　移液器不準(zhǔn)、吸頭殘留液體或加樣速度過快導(dǎo)致量不足

　　二、高背景/假陽性

　　洗滌不凈?

　　洗液量不足、洗板針堵塞或浸泡時(shí)間過短，未結(jié)合物質(zhì)殘留

　　非特異性結(jié)合?

　　封閉不充分或樣本中血紅蛋白/細(xì)菌污染干擾

　　孵育過度?

　　溫育時(shí)間過長或溫度過高

　　三、白板(全板無顯色)

　　試劑錯(cuò)用?

　　誤將終止液當(dāng)作洗滌液或漏加酶標(biāo)抗體

　　底物失效?

　　TMB/H2O2配制過久或未避光保存

　　四、重復(fù)性差(CV>15%)

　　操作不一致?

　　加樣時(shí)間/速度差異大或復(fù)孔間洗滌力度不均

　　移液器誤差?

　　槍頭密封性差或未校準(zhǔn)導(dǎo)致加樣量波動(dòng)

　　五、標(biāo)準(zhǔn)曲線異常

　　稀釋錯(cuò)誤?

　　標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶不充分或梯度稀釋比例錯(cuò)誤

　　孔間污染?

　　加樣時(shí)液體濺灑或槍頭交叉使用

　　六、陰性對照顯陽性

　　交叉污染?

　　樣本/試劑污染或洗板不凈

　　封閉失效?

　　封閉液濃度不足或孵育時(shí)間過短

　　七、顯色過快/過慢

　　酶濃度異常?

　　HRP標(biāo)記抗體過量或失活

　　環(huán)境干擾?

　　室溫過高或底物接觸金屬器械

　　八、孔間顯色不均

　　液體蒸發(fā)?

　　孵育時(shí)未貼封板膜導(dǎo)致邊緣孔干燥

　　氣泡干擾?

　　加樣時(shí)產(chǎn)生氣泡影響反應(yīng)界面

　　九、樣本檢測值異常

　　預(yù)處理不當(dāng)?

　　溶血、脂血或反復(fù)凍融破壞靶標(biāo)

　　稀釋錯(cuò)誤?

　　未預(yù)實(shí)驗(yàn)確定合適稀釋倍數(shù)

　　十、酶標(biāo)板花板

　　纖維蛋白殘留?

　　血清未充分凝固或離心不凈

　　洗板沖擊力不足?

　　手工洗板時(shí)液體未垂直注入孔底

　　十一、讀值漂移

　　終止后延遲?

　　加終止液超過15分鐘未讀板

　　波長設(shè)置錯(cuò)誤?

　　酶標(biāo)儀未調(diào)至TMB最佳吸收峰(450nm)

　　建議實(shí)驗(yàn)前嚴(yán)格檢查試劑狀態(tài)、校準(zhǔn)儀器，并設(shè)置合理的質(zhì)控對照。若問題持續(xù)，可聯(lián)系試劑廠商獲取技術(shù)支持。

　　注：以上資料僅供參考，具體請咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。

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