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影響ELISA試劑盒測定成果的原因和解決辦法,有哪些?
更新時間:2024-09-06瀏覽:509次

  影響ELISA試劑盒測定成果的原因和解決辦法,有哪些?

  ELISA是什么?

  ELISA是酶聯(lián)免疫吸附測定法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA) 的簡稱。它是在免疫酶技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新型的免疫測定技術(shù) 。

  酶聯(lián)免疫吸附試驗的標(biāo)準(zhǔn)程序,通常是把蛋白、抗體、或激素等(即抗原)直接或是以捕捉抗體(capture Ab)固定在固相載體上,再加入一級檢測抗體(primarydetection Ab),形成一個抗原抗體的復(fù)合物。如果該抗體已經(jīng)用酶(enzyme)標(biāo)記了,即可用來直接測定抗原的量,若無,則可利用另一個酶標(biāo)記的二級抗體來測定抗原的量。測定抗原量的方法是加入該酶的底質(zhì)(substrate),作用后產(chǎn)生出現(xiàn)的顏色深淺和樣本中的抗原量呈正比的關(guān)系,依此原理計算出樣本中的抗原總量或濃度。

  ELISA試劑盒方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定,具有靈敏度高,操作簡略等優(yōu)點,但是在詳細(xì)實驗過程中影響要素較多,而且要按照嚴(yán)厲的闡明要求,在臨床檢驗中除正常反響外,有時??梢姷揭恍╁e誤成果(即假陽性或假陰性成果)。

  影響ELISA測定錯誤成果的原因主要有:

 ?、贅?biāo)本要素;

 ?、谠噭┮?

  ③操作要素。

  一、類風(fēng)濕因子

  人血清中IgM、IgG型類風(fēng)濕因子(RF)能夠與ELISA系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶符號二抗的FC段直接結(jié)合,然后導(dǎo)致假陽性。

  解決辦法:

  1.用F(ab)2替代完好的IgG;

  2.標(biāo)本用聯(lián)有熱變性(63℃,10 min)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有用);

  3.檢測抗原時,能夠用2-巰基yi醇等加入到標(biāo)本稀釋液中,使RF降解。

  二、補體

  ELISA系統(tǒng)中固相一抗和符號二抗過程中,抗體分子發(fā)作變構(gòu),其FC段的補體C1q分子結(jié)合位點被暴露出來,使C1q 能夠?qū)⒍哌B接起來,然后形成假陽性。

  解決辦法:

  1.用EDTA稀釋標(biāo)本;

  2.用53℃,10 min或56℃,30 min加熱血清使C1q滅活。

  三、嗜異性抗體

  人類血清中含有能與嚙齒類動物(如鼠等)Ig(s) 結(jié)合的天然嗜異性抗體,可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來,也能形成假陽性。

  解決辦法:

  可在標(biāo)本稀釋液中加入過量的動物Ig(s),但加入量不足或亞類不同時無效。

  四、嗜靶抗原的本身抗體

  抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的本身抗體,有時能與靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物,在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測定成果。

  解決辦法:

  測定前需用理化方法將其解離后再測定。

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