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細(xì)胞爬片的操作方法以及技巧!
更新時(shí)間:2021-07-20瀏覽:2693次

  細(xì)胞爬片的操作方法以及技巧!

  在醫(yī)學(xué)生物研究中,免疫熒光檢測(cè)等需用到細(xì)胞爬片?,F(xiàn)有的細(xì)胞爬片多采用表面平整、光滑的透明玻璃玻片。但在做免疫熒光檢測(cè)時(shí),為了節(jié)約抗體,需免疫組化筆在爬片上進(jìn)行范圍的圈定,將抗體加入劃定區(qū)域,免疫組化筆中的疏水成分阻滯抗體溢出所圈定的范圍,從而達(dá)到節(jié)約抗體的目的。細(xì)胞爬片是細(xì)胞培養(yǎng)中比較經(jīng)常會(huì)用到的,現(xiàn)將自己操作的一些方法與技巧拿與大家分享。

  細(xì)胞爬片的特點(diǎn):

  1.玻片表面經(jīng)過TC處理,雙面均可使用。

  2.γ射線滅菌,保證無菌。

  3.使用便捷,只需打開包裝,將爬片放入孔板內(nèi),將細(xì)胞懸液滴到爬片上即可培養(yǎng)。

  4.爬片厚度為0.17mm,直徑為8mm/14mm/20mm/25mm.分別適用于48孔細(xì)胞培養(yǎng)板/24孔細(xì)胞培養(yǎng)板/12孔細(xì)胞培養(yǎng)板/6孔細(xì)胞培養(yǎng)板。

  5.*吸附:該玻片表面具有的陽離子電荷,可以通過靜電作用吸附冰凍切片組織或細(xì)胞,使之粘附在玻片上,進(jìn)而在玻璃和切片組織之間形成共價(jià)鍵.因此,無需粘黏劑或者蛋白包被,該玻片也能牢固的粘附切片或細(xì)胞。

  爬片的準(zhǔn)備:

  1、爬片可用一般的蓋玻片,也可用專用爬片;

  2、應(yīng)用蓋玻片,可根據(jù)自己的需要剪裁成合適的大小,以備置于6孔板、12孔板或24孔板;

  3、將剪裁好的爬片,置于濃硫酸中浸泡并過夜,第二天先用自來水沖洗20遍,再用三蒸水沖洗3遍(個(gè)人認(rèn)為主要目的是沖洗干凈就可以了),放在飯盒或者培養(yǎng)皿(一定是玻璃的哦,要不然就……)中烘干后進(jìn)行高壓消毒。

  培養(yǎng)板的準(zhǔn)備:

  1、泡酸過夜

  2、沖洗,烘干(1、2步驟與前大致相同)

  3、放入超凈工作臺(tái)用紫外線照1~2小時(shí)就可以用了(在照之前可以將爬片一并放入,若細(xì)胞貼壁能力不強(qiáng),可經(jīng)多聚賴氨酸浸片后放入。貼壁能力強(qiáng)的話,就可以省略了,進(jìn)行紫外線消毒)

  注:此步自己的經(jīng)驗(yàn)是爬片可以先浸入消毒后的PBS內(nèi),緊接著放入培養(yǎng)板內(nèi)。目的:浸過PBS的爬片依靠表面的液體,可以用培養(yǎng)板孔底貼和緊密,以利于細(xì)胞長到爬片上。(自己剛開始做的時(shí)候,經(jīng)常就是細(xì)胞全都長在了爬片與培養(yǎng)板之間,爬片上細(xì)胞罕見。)

  細(xì)胞爬片:

  1、胰酶消化細(xì)胞后計(jì)數(shù)

  2、根據(jù)自己的需要選擇合適的細(xì)胞密度種入培養(yǎng)板內(nèi)即可

  3、第二天即可進(jìn)行干預(yù)措施

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